양계 일반농장과 동물복지농장에서의 환경 샘플링을 통한 살모넬라 검출율 비교

동물복지 사육(개방)형의 산란계 농장와 육계 농장 각 5개, 일반적인 케이지 사육형의 산란계 농장 5개, 육계 농장 10개를 선정하여 2018년도 11월부터 2019년도 6월까지 방문하였다. 산란계 복지농장은 5곳을 1차로 방문하여 농장마다 10개의 샘플을 수집하고(n=50), 이 중 4 곳은 2차로 재방문하여 농장마다 20개의 샘플을 수집하였다(n=80). 샘플 채취 장소는 간이 난상, 횃대, 모이통, 급수기, 슬레이트 바닥, 팬에서 총 130개의 샘플을 수집하였다. 산란계 일반 농장은 5곳을 1차로 방문하여 농장마다 10개의 샘플을 수집하고(n=50), 그중 3곳은 2차로 재방문하여 농장마다 20개의 샘플을 수집하였고(n=60), 모이통, 달걀 컨베이어 벨트, 바닥, 팬, 분변 컨베이어 벨트, 벽에서 총 110개의 샘플을 수집하였다. 육계 복지 농장 5곳은 총 2번씩 방문하였으며, 방문할 때 농장마다 20개의 샘플을 수집하였으며 급수대, 모이통, 환기팬, 히터, 벽, 출입문, 횃대에서 샘플을 채취하였다(n=200). 육계 일반농장은 10곳을 1 회 방문하여 급수대, 모이통, 환기팬, 히터, 벽, 출입문에서 샘플을 채취했으며 각 농가당 20개의 샘플을 수집했다(n=200). 샘플 채취는 멸균 관상붕대(대한위재상사, Korea)를 Buffered peptone water (BPW)(Difco, Franklin Lakes, USA)에 충분히 적신 뒤 샘플에 5∼10회 정도 비벼서 채취하였다.

샘플을 채취한 관상붕대를 BPW 30 mL에 37°C 24시간 동안 배양한 뒤, Rappaport-Vassiliadis(RV) broth(Difco, Franklin Lakes, USA) 10 mL에 100 μL 접종하여 42°C에서 48시간 동안 배양하였다(Choi et al., 2014). 샘플들은 XLD agar plate(센서젠, Korea)에 도말하여 37°C에서 배양하였다. 살모넬라로 의심되는 검은색 집락들은 Viral gene-spin^TM Viral DNA/RNA Extraction kit(iNtRON Biotech, Korea)을 사용하여 제조사에서 권장하는 방법에 의거하여 DNA를 추출하였다(Kim et al., 2007). PCR은 i-taq plus DNA polymerase kit(iNtRON Biotech, Korea)을 이용해 94°C에 3분 후 94°C에 1분, 52°C에 40초, 72°C에 30초 반응을 35회 반복한 뒤 72°C에 7분 과정을 거쳐 살모넬라 sdiA 유전자만을 증폭하였다(Halatsi et al., 2006). PCR 증폭 산물은 전기영동을 실시하여 sdi A 유전자 중 274 bp의 증폭 유무를 확인한 다음 마크로젠사(Macrogen Inc., Seoul, Korea)에 의뢰하여 염기서열 분석을 통해 최종 살모넬라 양성을 확인하였다. 양성 살모넬라 샘플의 혈청형을 확인하기 위해 Kauffmann-White scheme으로 O typing(Group O2, O4, O7, O8, O9, O9,46, O3,10, O1,3,19, O11, O13, O6,14, O16, O18, O21, O35), H₁typing 그리고 H₂typing을 진행하였다(Gelaw et al., 2018).

산란계 복지농장과 일반농장 살모넬라 양성율 비교, 육계 복지농장과 일반농장의 살모넬라 양성율의 비교를 위한 통계분석은 GraphPad (https://www.graphpad.com/quickcalcs/contingency1/)를 사용하였으며 Fisher’s exact test(Two-tailed)로 통계학적인 유의차(P value)를 분석하였다.

산란계 일반 농장에서는 5개 농장에서 채취한 110개의 샘플에서 살모넬라가 검출되지 않았고 산란계 복지 농장의 경우 5개 농가 중 한개의 농장에서 살모넬라가 검출되었다(20%) (Table 1). 복지 농장에서 채취한 총 130개의 샘플 중 급수대에서 채취한 한 개의 샘플(0.76%)이 살모넬라 양성으로 확인되었으며, 혈청형 검사 결과 Salmonellaenterica subsp. Enteritidis(SE)로 확인되었다(Table 1). 일반농장과 복지농장에서 채취한 샘플의 살모넬라 양성율 간의 P value는 1.00로 통계학적인 유의차 (P<0.05)는 보이지 않았다 (Table 1).

육계 일반 농장에서는 10개 농장 중 5 개의 농장(50%)에서 살모넬라가 검출되었고 200개의 샘플 중 급수대, 온풍기 및 벽에서 얻어진 7개 샘플로부터 살모넬라가 검출되었다(3.5%) (Table 2). 검출된 살모넬라는 Salmonellaenterica subsp. Senftenberg(n=1), SE(n=1)로 확인되었으며 혈청형이 확인되지 않은 샘플은 5개이다(Table 2). 육계 복지 농장에서는 5개 농가 중에서 4개의 농장에서 살모넬라가 검출되었고(80%), 총 200개의 샘플 중에 21개의 샘플(10.5%)이 양성으로 확인되었으며, 출입문을 제외한 대부분의 장소에서 검출되었다(Table 1). 살모넬라 혈청형은 Salmonellaenterica subsp. Grampian(n=1), Salmonellaenterica subsp. Virchow(n=1)로 확인되었고 혈청형이 확인되지 않은 샘플은 19개이다(Table 2). 일반농장과 복지농장에서 채취한 샘플의 살모넬라 양성율 간의 P value는 0.0057로 통계학적인 유의차 (P<0.05)를 보였다(Table 2).